猪圆环病毒纯化案例分享

猪圆环病毒病，是猪群的隐形杀手，是由猪圆环病毒2型（PCV2）引起的疾病，传染速度极快，是目前给国内养猪业造成经济损失较大的病毒性疾病之一。有效的疫苗免疫是目前最佳的防控手段。

对于动物疫苗的有效性和安全性，下游纯化工艺很关键，今天小编给大家分享猪圆环病毒疫苗的纯化方法及应用案例。

了解病原

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV），病毒粒子较小，直径约为17 nm。现已知PCV有两个血清型：PCV1和PCV2。PCV1为非致病性的病毒，PCV2为致病性的病毒。

PCV2病毒样颗粒(VLPs）是重组表达的PCV2 CAP蛋白，20面体，无包膜，每个病毒颗粒由60个Cap蛋白组装而成，分子量约为650kd，大小约为20nm。PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的首要致病因子。

纯化工艺

疫苗生产工艺方面，大肠杆菌、昆虫细胞/杆状病毒表达是常用的表达系统。其中大肠杆菌原核表达系统，可以在降低成本的同时，保证疫苗的免疫保护作用。

对于猪圆环病毒疫苗来说，纯化后的Cap蛋白纯度越高，组装的VLPs完整度、均匀度和完成比例就会越高。然而，PCV2的分子量较大（650kd），常规的层析介质孔道较小，大于200kd的蛋白很难进入孔道内部，结合量极小，回收率低。

由于大肠杆菌表达系统菌体破碎后的杂蛋白较多，纯化的难度较大，科诺赛根据猪圆环病毒的特点，经过各种方法的测试，为客户提供了最优的解决方案，含有猪圆环病毒VLP颗粒的菌体破碎液，经过离心过滤后采用超大孔层析介质进行离子交换层析纯化，一步纯化即可去除蛋白中的杂质，得到纯度90%以上Cap蛋白。

应用案例

层析填料：MoSphere 50V Q 超大孔阴离子交换层析介质

层析柱：HiQumn CTN30

缓冲液：A液：20 mM Tris，150 mM NaCl，pH 8.5，B液：20 mM Tris，1 M NaCl，pH 8.5

样品（大肠杆菌表达）经澄清过滤后，采取20% B液、100% B液梯度洗脱，收集液 SDS-PAGE电泳检测。

实验结果：

样品科诺赛MoSphere 50V Q超大孔离子交换层析介质，杂蛋白去除率可达90%，Cap蛋白纯度较高，完全满足疫苗的纯度要求，且适用于工业化生产放大。

MoSphere 50V Q产品特点

MoSphere 50V Q是一款超大孔离子交换层析介质，以亲水性PMMA为基质，粒径50μm，超大孔径的设计打破了常规层析介质的局限性。介质通过专有的表面修饰技术，在亲水性基质表面键合离子交换官能团Q，并确保了表面离子交换层的高密度和均一性。特点如下：

》高结合载量：

载量是常规琼脂糖介质的10倍以上，是常规聚合物介质的2倍；

》高回收率：

可保持大分子蛋白或病毒结构的完整性，得到高收率、高活性的目的蛋白；

》高分辨率、高柱效：

分子传质速度快，蛋白或病毒颗粒可以轻松进入孔内结合；

》非特异性吸附低：

微球表面进行亲水化改性，可解决某些疏水性强的蛋白或者病毒导致的强吸附问题；