猪圆环病毒纯化案例分享

时间:2023-12-08 15:26:27 点击数:

猪圆环病毒病,是猪群的隐形杀手,是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的疾病,传染速度极快,是目前给国内养猪业造成经济损失较大的病毒性疾病之一。有效的疫苗免疫是目前最佳的防控手段。

对于动物疫苗的有效性和安全性,下游纯化工艺很关键,今天小编给大家分享猪圆环病毒疫苗的纯化方法及应用案例。

了解病原

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV),病毒粒子较小,直径约为17 nm。现已知PCV有两个血清型:PCV1和PCV2。PCV1为非致病性的病毒,PCV2为致病性的病毒。

PCV2病毒样颗粒(VLPs)是重组表达的PCV2 CAP蛋白,20面体,无包膜,每个病毒颗粒由60个Cap蛋白组装而成,分子量约为650kd,大小约为20nm。PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的首要致病因子。

纯化工艺

疫苗生产工艺方面,大肠杆菌、昆虫细胞/杆状病毒表达是常用的表达系统。其中大肠杆菌原核表达系统,可以在降低成本的同时,保证疫苗的免疫保护作用。

对于猪圆环病毒疫苗来说,纯化后的Cap蛋白纯度越高,组装的VLPs完整度、均匀度和完成比例就会越高。然而,PCV2的分子量较大(650kd),常规的层析介质孔道较小,大于200kd的蛋白很难进入孔道内部,结合量极小,回收率低。

由于大肠杆菌表达系统菌体破碎后的杂蛋白较多,纯化的难度较大,科诺赛根据猪圆环病毒的特点,经过各种方法的测试,为客户提供了最优的解决方案,含有猪圆环病毒VLP颗粒的菌体破碎液,经过离心过滤后采用超大孔层析介质进行离子交换层析纯化,一步纯化即可去除蛋白中的杂质,得到纯度90%以上Cap蛋白。


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应用案例

层析填料:MoSphere 50V Q 超大孔阴离子交换层析介质

层析柱:HiQumn CTN30

缓冲液:A液:20 mM Tris,150 mM NaCl,pH 8.5,B液:20 mM Tris,1 M NaCl,pH 8.5

样品(大肠杆菌表达)经澄清过滤后,采取20% B液、100% B液梯度洗脱,收集液 SDS-PAGE电泳检测。


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实验结果:

样品科诺赛MoSphere 50V Q超大孔离子交换层析介质,杂蛋白去除率可达90%,Cap蛋白纯度较高,完全满足疫苗的纯度要求,且适用于工业化生产放大。


MoSphere 50V Q产品特点

MoSphere 50V Q是一款超大孔离子交换层析介质,以亲水性PMMA为基质,粒径50μm,超大孔径的设计打破了常规层析介质的局限性。介质通过专有的表面修饰技术,在亲水性基质表面键合离子交换官能团Q,并确保了表面离子交换层的高密度和均一性。特点如下:

》高结合载量:

载量是常规琼脂糖介质的10倍以上,是常规聚合物介质的2倍;

》高回收率:

可保持大分子蛋白或病毒结构的完整性,得到高收率、高活性的目的蛋白;

》高分辨率、高柱效:

分子传质速度快,蛋白或病毒颗粒可以轻松进入孔内结合;

》非特异性吸附低:

微球表面进行亲水化改性,可解决某些疏水性强的蛋白或者病毒导致的强吸附问题;

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