亲和层析法分离纯化动物腹水中抗体的实验方法

基本原理： protein A和proteiin G 可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合。Protein A Chromrose TM4FF和Protein G ChromroseTM 4FF是专业偶联耐碱重组Protein A和Protein G的高流速琼脂糖层析介质，当动物腹水从层析柱中流过时，特异性的IgG就与层析介质中的配基结合，其他杂蛋白则穿流而过。

因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同，我们需要具体情况具体对待，分别选择protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G组合。一般推荐小鼠单抗IgG2a,IgG2b,IgG3，兔，人，猪的多克隆抗体用protein A纯化，而小鼠单抗IgG1, 大鼠单抗，小鼠，大鼠，山羊的多克隆抗体则选择用protein G纯化。

具体实验步骤如下：

1. 根据要纯化的抗体量选择适当的层析柱，推荐使用HiQumnTM CTN30型中高压层析柱（内径10mm）或者HiQumnTM CXK10型层析柱（内径16mm）或者更大的层析柱

2. 将计算过合适体积的Protein A Chromrose TM4FF或Protein G ChromroseTM 层析介质填装到HiQumnTM 层析柱中，接入层析系统进行加压，待流动相流过3个柱体积后，将HiQumnTM 层析柱柱头调节杆调整到层析介质下方2-3mm处固定

3. 通过层析系统泵入要纯化的经预处理了的动物腹水一个柱体积，流动相为结合液。建议流速CV/5min；

5. 用5倍柱体积的结合液平衡柱子；

5. 用5-10倍柱体积的缓冲液清洗层析柱，直到没有样本流出；

6. 用5-10倍柱体积洗脱液洗脱层析柱，并收集抗体；

7. 将所纯化的抗体加入30%-50%的甘油置于-20摄氏度或者-80摄氏度即可长期保存。

图1. 科诺赛HiQumn CTN30-10层析柱

图2. 科诺赛Protein A Chromrose 亲和层析介质